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細胞學堂 | RAW 264.7誘導極化及鑒定大全

更新時間：2023-02-03  |  點擊率：1880

RAW 264.7（小鼠單核巨噬細胞白血病細胞）是破骨細胞、炎癥研究最-常用的體外模型之一，被廣泛用于研究風濕性關節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、骨質(zhì)溶解、牙周炎等骨骼疾病。


極化方式


巨噬細胞是具有異質(zhì)性的一類免疫細胞，在體內(nèi)外不同環(huán)境影響下可極化為不同表型參與機體生理、病理反應。從激活方式上分為經(jīng)典激活的巨噬細胞M1和選擇性激活的巨噬細胞M2。


1

M1型分化

細菌和脂多糖（LPS）可以誘導巨噬細胞向M1型分化，產(chǎn)生促炎細胞因子，抵抗病原入侵，但也會造成機體損傷，在實驗中可采用2.5ng/mL IFN-γ和200ng/mL LPS共同作用12小時誘導其極化；


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圖1. a.RAW 264.7 未分化形態(tài)圖 b.RAW 264.7 M1型分化形態(tài)圖




2

M2型分化

白細胞介素（IL-4）可以誘導巨噬細胞向M2型分化，分泌抗炎細胞因子，并在組織修復與重建和腫瘤的形成過程中發(fā)揮作用，在實驗中可采用10ng/mL IL-4作用12小時誘導其極化。


圖2. RAW 264.7 不同分型形態(tài)圖



鑒定方法


M1、M2具有各自特征性標志分子，iNOS、CD86、TNF-α是常見的M1型巨噬細胞的標志分子，IL-10、Arg-1、CD206是常見的M2型巨噬細胞標志分子。一般在實驗研究中：

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WB可以分析RAW264.7細胞iNOS、YM-1和Arg-1的表達水平（如圖3）；


圖3. WB分析照射對IL-4誘導的RAW264.7細胞YM-1和Arg-1的表達影響

2

流式細胞術（FCM）可以分析RAW264.7細胞表面CD86和CD206的表達（如圖4）；


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圖4. 流式細胞術分析照射對IL-4誘導的小鼠RAW264.7細胞CD206和CD209的表達

3

實時定量 PCR 和 ELISA 可以分析IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-12 及 IL-10 等細胞因子的表達及分泌(如圖5）；


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圖5. 用于實時熒光定量PCR的引物序列

4

Griess reagent 可以分析細胞培養(yǎng)上清 NO 生成（如圖6）。


圖6. 不同樣品對RAW 264.7中NO產(chǎn)生的影響


參考文獻


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